В начале каждой «Убойной ночи» ведущий Павел Виноградов задает тему для разговора. Как правило, это актуальные новости, события и проблемы. В программе есть шесть участников (все они — юмористы из «Убойной лиги»), которые делятся на две команды: «красная» выступает за обозначенную тему, а «синяя» — против нее.
Далее «Убойная ночь» делится на несколько частей: обсуждение темы — все игроки говорят о заданной теме и приводят свои доводы; блиц-опрос — ведущий рассказывает короткий и забавный факт в тему передачи и задаёт один и тот же вопрос на основе этого факта всем шестерым участникам обсуждения; обсуждение фотографии — участники обсуждают фотографию, присланную телезрителями на заданную тему; «Горячий стул» — один участник должен быстро отвечать на задаваемые ведущим вопросы, присланные телезрителями; номера — участники в студии придумывают номера на тему, заданную Павлом Виноградовым.
В течение всей «Убойной ночи» аккомпанемент шоу создает гитарист Алекс Аморалес. В конце программы при помощи голосования в зрительном зале определяется команда-победитель, и ей предоставляется право заключительного слова.
В декабре 2009 года шоу выходило под названием «Убойный вечер» (новым ведущим стал Таир Мамедов), но вскоре вовсе прекратило свое существование.