Два новых сотрудника анимационной студии Уолта Диснея остаются на ночь на работе и сталкиваются с удивительным зрелищем. Все персонажи Диснея — старые и новые, герои и злодеи, принцессы и их принцы — оживают и собираются вместе, чтобы сделать групповую фотографию к 100-летнему юбилею студии.
Художественный стиль «Однажды в студии» сочетает в себе живые съемки, традиционную рисованную анимацию и компьютерную 3D-графику. В короткометражном фильме появятся более 500 персонажей из разных работ студии Дисней.